Rosetta(DE3)感受态细胞
目录号 ：BL0811
保存条件：-80℃ ，干冰运输 ，避免反复冻融
产品规格 ：10×100ul
产品介绍 ：
本产品是采用进口Rosetta菌株 ，经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA 的热击转化 。Rosetta菌株是携带氯霉素抗性质粒BL21的衍生菌 ，补充大肠杆菌缺乏的 6种稀有密码子（AUA ，AGG ，AGA ，CUA ，CCC ，GGA）对应的tRNA ，提高外源基因 ，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平 。使用pUC19质粒检测 ，转化效率可 达10^7 。
操作方法 ：
1．取感受态细胞置于冰浴中 。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl ，可以根据实际情况分装使用 。以下实验以50 μl感受态细胞为例 。
2．待感受态细胞融化后 ，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA ，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和） ，用移液器轻轻吹打混匀 ，冰浴30分钟 。
3．42℃热击45秒 ，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟 。
4．向每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素） ，混匀后置于37℃摇床 ，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏 。
5．根据实验需求 ，取适量已转化的感受态细胞 ，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上 ，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开 ，将平板置于37℃直至液体被吸收 ，倒置培养 ，37℃培养12-16小时 。
注意事项:
1）涂布用量可根据具体实验调整 。若转化的DNA总量较多 ，可取少量转化产物涂布平板 ；若转化的DNA总量较少 ，可取200-300 μl转化产物涂布平板 。若预计的克隆数较少 ，可通过离心（4,000 rpm ，2分钟）后吸除部分培养液 ，悬浮菌体后将其涂布于平板中 。
2）新制备的固体培养基不易涂干 ，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养 。
3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存 ，如果次日的转化菌落数过少 ，可以将剩下的菌液再涂布新培养 基进行培养 。